本发明涉及具有乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性的紫色细杆石蕊(Cladonia macilenta purple)的菌体或培养提取物、布里醌(Biruloquinone)及其药用盐,以及包含上述物质的用于预防、治疗或缓解神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的药物组合物及功能性食品。
1.具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的来源于紫色细杆石蕊(Cladoniaxa0macilentaxa0purple)菌体或其培养物的提取物。
2.具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的来源于紫色细杆石蕊的化学式I的布里醌(Biruloquinone)或其药用盐,<化学式I> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
3.用于预防或治疗神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的药物组合物,其包括至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、化学式I的布里醌和布里醌的药用盐,<化学式I> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
4.根据权利要求3所述的药物组合物,其中所述神经退行性疾病选自下组:阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、缺血性脑病、重症肌无力、记忆力减退和酒精成瘾。
5.用于预防或治疗神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的方法,其包括对个体施用权利要求3或4所述的药物组合物。
6.用于预防或缓解神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的健康食品,其包括至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、化学式I的布里醌和布里醌的药用盐,<化学式I> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
7.根据权利要求6所述的食品,其中所述神经退行性疾病选自下组:阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、缺血性脑病、重症肌无力、记忆力减退和酒精成瘾。技术领域
本发明涉及用于乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)抑制剂的紫色细杆石蕊(Cladoniaxa0macilentaxa0purple)的菌体或培养提取物、布里醌(Biruloquinone)及其药用盐,以及包含上述物质的药物组合物及功能性食品。
背景技术
乙酰胆碱酯酶,也已知为AChE,是一种能使具有调节副交感神经元活性的神经传递乙酰胆碱(acetycholine,ACh)降解(通过其水解活性)生成胆碱和乙酸的酶。其在内质网膜上形成并移动至细胞膜发挥其功能。其是一种重要的酶,多发现于胆碱能神经元及其周围,尤其在神经肌肉接合处,也发现于血浆、肝和其它组织中。通常,乙酰胆碱是由轴突终端膜分泌至突触间隙(synapticxa0cleft)并通过结合突触后神经元的受体来传递动作电位的神经递质。在传递神经元的刺激后,该物质在乙酰胆碱酯酶作用下分解为胆碱和乙酸,然后通过再吸收被运回至神经末稍并在那里用于合成新的乙酰胆碱分子。对乙酰胆碱进行积极研究后发现,就乙酰胆碱的合成和分解机制而言,很多身体上和精神上的疾病/失调都与乙酰胆碱浓度的非正常减少显著相关。阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sxa0disease(AD)),也称为老年性痴呆症,是最典型的乙酰胆碱相关性疾病。阿尔茨海默氏病的主要症状是记忆力减退、语言和空间感知能力及判断力失调。关于该疾病的发病原因或发病进程,发表过很多假说,但目前还不明确。然而,阿尔茨海默氏病患者的中枢神经系统通常受损,尤其是胆碱能神经元的损伤最为严重。而且,据报道胆碱能神经元的这种损伤与阿尔茨海默氏病患者的学习、记忆力及认知力的衰退存在很大的相关性。改善与AD相关的胆碱能神经元的努力主要以胆碱假设(Cholinergicxa0Hypothesis)为主。基于这种假设,沿着改善受损胆碱能神经元的方向积极开发治疗剂。为了改善受损的胆碱能神经元,可采用以下方法:使用乙酰胆碱前体(AChxa0precursor)即胆碱能神经递质,使用胆碱能受体激动剂(receptorxa0agonist),或者相对于AChE抑制剂保持突触中ACh的浓度。但胆碱能受体激动剂具有在体内容易降解的缺点,因此,通常采用AChE抑制剂。实际上,通过美国食品药品监督管理局(FDA)认证的并用作阿尔茨海默氏病治疗剂的AChE抑制剂的示例有塔克林(tacrine)(THA,ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="261"/>多奈哌齐(donepezil)ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="277"/>和卡巴拉汀(rivastigmine)ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="260"/>其中,提取自天然产物的化合物有加兰他明(galanthamine,Galanthusxa0nivalis)、石杉碱甲A(huperzinexa0A,Huperziaxa0serrata)等。通过预防ACh的降解来保持ACh浓度的这些AChE抑制剂具有改善认知功能的效果。然而,已知这些AChE抑制剂具有肝毒性、半衰期短、低生物利用度等问题。因此,需要进行更多的研究以开发新的AChE抑制剂。同时,与胆碱神经系统相关的其它病理学研究报道,肠胃运动由神经刺激进行调节,而乙酰胆碱能够改善胃运动。因此,有时会使用一种被称为新斯的明(neostigmine)的AChE抑制剂,用于治疗由术后肠梗阻增加导致的腹部膨胀或者由膀胱逼尿肌无力导致的排尿障碍。此外,重症肌无力(myastheniaxa0gravis)是一种自身免疫性神经肌肉疾病,其发生原因是位于突触后神经肌肉接合处的乙酰胆碱受体受到破坏,从而抑制了神经递质乙酰胆碱的刺激作用。针对这种病症,医学上采用乙酰胆碱酯酶抑制剂如溴吡斯的明(mestinon)或新斯的明进行治疗。溴吡斯的明是最常用的治疗重症肌无力的药物,其能抑制乙酰胆碱酯酶的水解活性,从而增加乙酰胆碱的浓度使得乙酰胆碱保留在肌肉细胞中的受体上。尽管该药物具有短时间内达到治疗效果的优点,但根据其剂量经常出现腹痛或腹泻的副作用。而且,目前开发的重症肌无力治疗用乙酰胆碱酯酶抑制剂,对于尼古丁型和毒蕈碱型乙酰胆碱受体的选择性不足,因此由于毒蕈碱受体的刺激导致产生副作用。此外,其吸收率非常低,由于仅能实现部分效果,因此其治疗范围狭窄。除此之外,青光眼是一种眼部疾病,由于眼内压升高造成视神经损伤,导致进展性、不可逆性失明。在这种情况下,据报道乙酰胆碱酯酶抑制剂会促进水性液体的再吸收,从而降低眼内压。但需要特别注意的是,当使用目前开发的乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗青光眼6个月以上时,可能会存在白内障的风险。为了有效的预防和治疗与乙酰胆碱浓度减少有关的各种疾病/失调,曾经提出通过施用乙酰胆碱前体以促进乙酰胆碱合成的替代方案。然而,由于其短期效应不能进入血脑屏障(BBB),因此主要采用乙酰胆碱酯酶抑制剂如塔克林遏制乙酰胆碱的水解作用的药物治疗方法。然而,如上所述,据报道目前开发的和市售的乙酰胆碱酯酶抑制剂会引发一系列副作用,例如肝病、胃肠紊乱(腹痛或腹泻)、肌肉痛等。同时,地衣类(lichens)作为真菌类(fungi)、藻类(algae)和/或蓝细菌(cyanobacteria)的共生复合体,划分为约14000种。曾经提出将地衣类的次生代谢产物(secondaryxa0metabolites)用作抗菌剂(antimicrobialxa0agent)或者抗食草动物剂(antiherbivorexa0agent)。而且,地衣类的一些提取物在民间曾用作各种治疗剂,并揭示出地衣类的多种代谢物具有各种生物活性,如抗肿瘤、抗菌(antibacterial)、抗真菌(antifungal)、抗病毒(antiviral)、解热(antipyretic)、抗炎(antiinflammatory)以及抗氧化活性(Oksanen,I.2006.地衣类的生态学和生物技术方面的问题(Ecologicalxa0andxa0biotechnologicalxa0aspectsxa0ofxa0lichens).应用微生物学与生物技术(Appliedxa0Microbiologyxa0andxa0Biotechnology).73(4):723-734.)。因此,地衣类代谢物作为潜在的药学制剂(pharmacologicalxa0agents)来源,受到极大的关注。对此,本发明人努力寻找能够治疗与乙酰胆碱浓度非正常减少有关的各种疾病/失调的物质;因此发现地衣类形成真菌(lichensxa0formingxa0fungi(LFF))能有效抑制乙酰胆碱酯酶。
发明内容
技术方案因此,本发明的一个目的是提供能抑制AChE活性的紫色细杆石蕊(Cladoniaxa0macilentaxa0purple)的菌体提取物(cellxa0extract)或培养提取物(culrutexa0extract)。本发明的另一个目的是提供具有抑制AChE活性的能力且来源于紫色细杆石蕊的化学式I的布里醌(Biruloquinone)或其药用盐。本发明的另一个目的是提供紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌或布里醌的药用盐作为AChE抑制剂的应用。本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的药物组合物,其包括至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐。本发明的另一个目的是提供紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌或布里醌的药用盐在预防或治疗神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼中的应用。本发明的另一个目的是提供用于预防或治疗神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的方法,其包括对个体施用至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐。本发明的另一个目的是提供用于预防或缓解神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼的食品,其包括对个体施用的至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐。有益效果紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐是强效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,其能抑制乙酰胆碱酯酶的活性。因此,含有它们的药物组合物或食品可用于预防或治疗与由乙酰胆碱酯酶活性引起的乙酰胆碱浓度非正常减少有关的疾病/失调,如神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症、或者青光眼。特别地,因为紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌及其药用盐是来源于紫色细杆石蕊的天然活性成分,所以它们对活的机体具有安全性。因此,可将它们施用于罹患所述疾病/失调的患者或希望预防所述疾病/失调的患者,不会像传统的乙酰胆碱酯酶抑制剂那样产生副作用。
附图说明
将结合附图并通过以下对本发明的描述呈现本发明的上述或其它目的以及特征,其中:图1:示出在南极、匈牙利及中国采集的16(十六)种地衣类的叶状体(Thallus)提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性的柱状图;图2:示出在南极、匈牙利及中国采集的16(十六)种地衣类的叶状体(Thallus)提取物中分离的地衣类形成真菌(lichens-formingxa0fungus)提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性的柱状图;图3:布里醌对AChE的浓度-抑制曲线;图4:布里醌PC12细胞的细胞毒性分析结果;图5:示出布里醌预防氧化应激的能力的柱状图;以及图6:示出布里醌对AChE的抑制行为的双倒数图(Lineweaver-Burkxa0plot)。
具体实施方式
除非另有规定,本文所用的技术和科技术语具有与本发明所属领域技术人员通常理解的相同的含义。此外,本文中提及的所有文献均以全文参阅的方式并入于此。本发明的一方面提供了能抑制乙酰胆碱酯酶活性的紫色细杆石蕊的菌体提取物或培养提取物。细杆石蕊(Cladoniaxa0macilent)是在世界范围内包括丹麦广泛分布的地衣类形成真菌(Lichen-formingxa0fungi,LFF),它在形态学上及化学上有2(两)种不同类型的次代培养物,即紫色(purple)类型和白色(white)类型。本发明人发现,在上述两种类型中,紫色类型具有强效的乙酰胆碱酯酶抑制活性,而白色类型显示低活性。在本发明中所述紫色类型是指紫色细杆石蕊(Cladoniaxa0macilentaxa0purple)或细杆石蕊(Cladoniaxa0macilent)。在本发明中,术语“提取物”是指采用相关领域已知的常规方法从紫色细杆石蕊或其培养滤液(culturalxa0filtration)中提取的物质。此外,“提取物”不仅包括上述提取成分,还包括该提取成分的干燥粉末以及利用它们进行剂型化的所有形态。在本发明中,用于从紫色细杆石蕊或其培养滤液中提取以获得本发明提取物的溶剂可以为C_1-4醇或其水溶液如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇,正己烷,乙酸乙酯,丙酮,二氯甲烷,或其混合物,优选的C_1-4醇如甲醇或乙醇。提取时,可以使用紫色细杆石蕊原材或者其粉碎形式。溶剂的使用量范围为每100g干燥紫色细杆石蕊使用0.1~5L,所述提取的非限制性温度的范围为4~120°C。此外,提取可进行10分钟~30天,可使用常规的提取仪器、超音波粉碎提取器或者分镏器。所获得的提取物中的溶剂可通过吸滤和/或冷冻干燥除去。在本发明中,“乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase)”,也已知为“AChE”,是一种能使神经传递乙酰胆碱降解(通过其水解活性)生成胆碱和乙酸的酶,与乙酰胆碱的浓度变化具有很大的关联性。因此,乙酰胆碱酯酶抑制剂已用于预防和治疗与乙酰胆碱浓度非正常减少有关的多种疾病/失调,即神经退行性疾病,例如阿尔茨海默氏病(Alzheimer′sxa0disease)、帕金森氏病(Parkinson′sxa0disease)、缺血性脑病(Ischemiaxa0brainxa0disease)、重症肌无力(myastheniaxa0gravis)、记忆力减退、酒精成瘾等,胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼。本发明的紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物具有强效的乙酰胆碱酯酶抑制活性(约60%),相比其它地衣类叶状体提取物或者地衣类形成真菌(LFF)提取物,具有优异的抑制活性。因此,本发明的紫色细杆石蕊提取物能够用于预防和治疗由乙酰胆碱酯酶活性引起的乙酰胆碱浓度非正常减少相关的疾病/失调,即神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼。上述神经退行性疾病的示例有阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、缺血性脑病、重症肌无力、记忆力减退、酒精成瘾等。本发明的另一方面提供对乙酰胆碱酯酶的活性具有抑制能力且来源于紫色细杆石蕊(Cladoniaxa0macilentaxa0purple)的化学式I的布里醌(Biruloquinone),<化学式I> ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="612"/> 化学式I的布里醌是从紫色细杆石蕊分离的主要化合物。在本发明中,布里醌根据不同情况还包括其药用盐。除非另有规定,布里醌的药用盐可包括基于布里醌的酸性或者碱性盐。这些酸性或碱性盐的示例为羟基的钠、钙及钾盐,以及氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、孟德立酸盐(madelate)、甲烷磺酸盐(甲磺酸盐)及对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐),其可通过本领域已知的方法或者工艺进行制备。此外,与游离酸(freexa0acid)形成的酸加成盐也可用作本发明的药用盐。酸加成盐可通过常规方法获得,例如将化合物溶解于过量的酸溶液中,然后使用水溶性有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮或者乙腈对上述酸加成盐进行沉淀。对等摩尔量的化合物及水或醇(例如乙二醇单甲醚)中的酸进行加热,然后通过蒸发干燥得到的混合物,或者通过抽吸过滤沉淀的盐。可用有机酸或无机酸作为游离酸。无机酸的示例为盐酸、磷酸、硝酸或酒石酸,有机酸的示例为甲烷磺酸(Methanexa0sulfonicxa0acid)、对甲苯磺酸(p-toluenexa0sulfonicxa0acid)、乙酸、三氟乙酸、枸橼酸、马来酸(maleicxa0acid)、琥珀酸、草酸、苯甲酸、富马酸、孟德立酸(mandelicxa0acid)、丙酸(propionicxa0acid)、乳酸(lacticxa0acid)、乙醇酸(glycolicxa0acid)、葡萄糖酸(gluconicxa0acid)、半乳糖醛酸(galacturonicxa0acid)、谷氨酸、戊二酸(glutaricxa0acid)、葡萄糖醛酸(glucuronicxa0acid)、天门冬氨酸(asparticxa0acid)、抗坏血酸、碳素酸(carbonicxa0acid)、香草酸(vanillicxa0acid)、氢碘酸(hydroiodicxa0acid)。此外,本发明也可使用与碱形成的药用金属盐。碱金属盐或者碱土金属盐可通过常规方法获得,例如:将化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或者碱土金属氢氧化物溶液中,过滤不溶的化合物盐,蒸发并干燥留下的滤液。优选钠、钾或者钙盐,也优选与此对应的银盐,其通过将钠、钾或者钙盐与适当的银盐(例如硝酸银)反应制备。在本发明的一个具体实施例中,从紫色细杆石蕊的菌体提取物或培养提取物中分离化学式I的布里醌的方法,其包括:利用低级醇如C_1-4醇或乙酸乙酯(ethylxa0acetate)从紫色细杆石蕊中制备提取物,将上述提取物在柱上通过甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(90∶20∶20,v/v)的混合溶剂进行洗脱。本发明的紫色细杆石蕊的菌体和培养提取物以及从中分离的化学式I的布里醌表现出的乙酰胆碱酯酶抑制活性为27.1μg/ml的IC₅₀,且其作为混合型抑制剂。此外,它们能显著降低氧化应激,通过毒性试验发现它们没有毒性。因此,本发明的紫色细杆石蕊的菌体和培养提取物以及布里醌能够用于预防和治疗与由乙酰胆碱酯酶活性引起的乙酰胆碱浓度非正常减少相关的疾病/失调,即神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼。上述神经退行性疾病的示例有诸如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、缺血性脑病、重症肌无力、记忆力减退及酒精成瘾等。因此,本发明提供用于预防或治疗与由乙酰胆碱酯酶活性引起的乙酰胆碱浓度非正常减少相关的疾病/失调即神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼的药物组合物,其包括至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌及布里醌的药用盐。神经退行性疾病的示例如上。本发明的药物组合物可与药用载体和/或赋形剂一起制成各种制剂。适当的载体和赋形剂的示例有:乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁及矿物油。任选地,本发明的组合物还可以包括填充剂、抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香料、乳化剂、防腐剂等。本发明的药物组合物可通过任何常规途径给药,如口服、局部用药(包括口腔(buccal)、舌下、皮肤及眼内途径)、非口服(皮下、皮内、腹膜内、脑脊髓腔内、肌肉内、血管内及关节内途径),或者透皮途径,但本发明不限于这些示例性的给药方式。此外,本发明的组合物可作为单独疗法应用。但其可以与本领域已知的其它乙酰胆碱酯酶抑制剂一起同时或者依次给药。这些乙酰胆碱酯酶抑制剂的示例有:多奈哌齐(Aricept)(日本卫材(Eisai)销售的多奈哌齐盐酸盐(donepezilxa0hydrochloride)胶囊)、阿米林(Amirine)(日研制药公司(Nikken))、SM-10888(日本住友制药(Sumitomo))、MF-217(Mediolanumxa0Pharmaceutici-Angelini)、Roxa046-5934和HP-290(赫斯特-拉塞尔(Hoesht-Russel))、ENAxa0713(山德士(Sandoz))、伊他美林(Itameline)(赫斯特-拉塞尔),美曲磷酯(Metrifonate)(拜尔-威尔士(Bayer-Wiles))、TAKxa0147(日本武田(Takeda))、CPxa0118.954(美国辉瑞(Pfizer))、加兰他明(Galanthamine)(内德海因(Naedheim)制药公司)、ONOxa01603(日本小野药品(Ono))、齐罗硅酮(Zifrosilone)(马瑞恩(Marionxa0Merrelxa0Dow))。这些乙酰胆碱酯酶抑制剂公开于Brufani等(阿尔茨海默氏病:从分子生物学治疗(Alzheimerxa0Disease:Fromxa0Molecularxa0Biologyxa0toxa0Therapy),eds.Becker等,pp.171-177(1996));Schmidt等(阿尔茨海默氏病:从分子生物学治疗(Alzheimerxa0Disease:Fromxa0Molecularxa0Biologyxa0toxa0Therapy),eds.Becker等,pp.217-221(1996));Vargas等(阿尔茨海默氏病:从分子生物学治疗(Alzheimerxa0Disease:Fromxa0Molecularxa0Biologyxa0toxa0Therapy),eds.Becker等,pp.251-255(1996));Greig等(阿尔茨海默氏病:从分子生物学治疗(Alzheimerxa0Disease:Fromxa0Molecularxa0Biologyxa0toxa0Therapy),eds.Becker等,pp.231-237(1996));及Giacobini(阿尔茨海默氏病:从分子生物学治疗(Alzheimerxa0Disease:Fromxa0Molecularxa0Biologyxa0toxa0Therapy),eds.Becker等,pp.187-204(1996))。本发明的组合物能够在神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼的发作初期给药,或者也可在上述疾病进展后给药。例如,能够在神经退行性疾病发作后的1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10小时后给药,但并不限于此。而且,给药本发明的组合物能够用于预防神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼。本发明的组合物可根据需要反复给药。例如,临床需要的情况下,可每日给药,或者每隔一段适当的时间,如1~12周,优选3~8周给药,但不限于此。本发明的组合物可进行剂型化以提供活性成分的即释或者缓释。这类剂型可以是片剂、散剂、丸剂、袋装剂(sachet)、酏剂(elixir)、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气溶胶、软质或者硬质胶囊、无菌注射液、无菌粉末等。本发明的组合物可优选以单剂量形式提供。此外,本发明的组合物可以以“治疗有效量”给药。本文所用的“治疗有效量”是指足以治疗疾病/失调的量。应当理解,组合物的治疗有效量应根据各种相关因素确定,这些因素包括个体患者待治疗的状况、年龄、体重、健康、反应敏感性和性别,饮食、给药时间、给药途径、排泄率、治疗期间、患者症状的严重性以及与本发明的组合物联合给药或同时给药的药物,以及药学领域已知的因素;因此,上述剂量不应理解为以任何方式限制本发明的范围。例如,用于除人类之外的动物的情况下,本发明组合物单次剂量的给药量可以为200~10000单元(IU)/体重(kg),优选地200~5000单元(IU)/体重(kg),更优选地200~2000单元(IU)/体重(kg),最优选地500~1000IU。此外,用于人类的情况下,抛开体重因素,本发明组合物单次剂量的给药量可以为25000~45000IU,优选地25000~40000IU,更优选地30000~40000IU。在另一个实施方案中,本发明涉及用于预防或治疗与由乙酰胆碱酯酶活性引起的乙酰胆碱浓度非正常减少相关的疾病/失调如神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼的方法,其包括对个体施用至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐。本文所用的术语“用于治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指治疗学上的处置及预防或者保护方法。因此,本发明中需要治疗的患者可以是希望预防神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼的个体以及罹患上述疾病的个体。本文所用的术语“个体”是指需要治疗的人类、灵长类及某些哺乳动物例如狗、马、猫、羊、猪、牛等。在另一个实施方案中,本发明涉及用于预防或缓解与由乙酰胆碱酯酶活性引起的乙酰胆碱浓度非正常减少相关的疾病/失调如神经退行性疾病、胃肠道或膀胱平滑肌的肌无力症或者青光眼的健康食品,其包括至少一种选自下组的物质:紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐。本发明的健康食品可以包括至少一种选自紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物、布里醌和布里醌的药用盐单独或与其它食品或食品成分一起组成的物质。此外,本发明的健康食品可根据常规方法应用。食品中含有的成分的比例应膈肌使用目的(预防、保健或治疗性处置)确定。通常,在制造食品或者饮料时,紫色细杆石蕊的提取物、布里醌或其药用盐的添加量可以为10重量%或以下,优选地5重量%或以下。但以健康调节为目的长期服用的食品可包括少于上述量的所述活性成分。而且,由于上述活性成分不存在安全方面的问题,因此本发明的食品中可以使用多于上述量的活性成分。上述健康食品类型无特殊限制。可包括紫色细杆石蕊提取物、布里醌或其药用盐的健康食品的示例有肉类、香肠、面包、巧克力、糖类、零食类、饼干类、比萨、拉面或其它面条类、口香糖类、含有冰淇淋的乳制品、各种汤类、饮料、茶、饮剂、酒精饮料及维生素复合剂。本发明的食品包括通常意义上的所有健康食品。本发明的食品为健康饮料的情况下,与常规饮料一样,所述健康饮料可含各种香味剂、天然碳水化合物等作为添加成分。上述天然碳水化合物可以为单糖如葡萄糖或果糖、双糖如麦芽糖或蔗糖,天然甜味剂如糊精、环糊精或者合成甜味剂如糖精或天冬甜素等。上述天然碳水化合物的比例通常为每100ml健康饮料含有约0.01~0.4g,优选地0.02~0.03g。除上述成分之外,本发明的食品可进一步含有多种营养补充剂、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、胶体粘性保护剂(protectivexa0colloidxa0viscosityxa0agent)、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇类和用于碳酸饮料的碳酸化剂。此外,本发明的食品可含有制造天然果汁、果汁饮料及蔬菜饮料时使用的果肉(pulp,fruitxa0flesh)。这些添加剂的比例并不重要,通常每100重量份本发明的食品,添加剂的选择范围为0.01~0.1重量份。将参考以下实施例进一步详细描述本发明。然而,应当理解本发明不限于以下具体实施例。实施例1:地衣叶状体提取物及地衣形成真菌提取物的制备从2007年~2008年期间在南极、匈牙利及中国采集16种地衣叶状体。此外,采用山本方法(Yamamoto′sxa0method)(Yamamoto,Y.,Mizuguchi,R.和Yamada,Y.1985.红皮松萝和Ramalinaxa0yasudae的组织培养物以及从其培养物中制备松萝酸(Tissuexa0culturesxa0ofxa0Usneaxa0rubescensxa0andxa0Ramalinaxa0yasudaexa0andxa0productionxa0ofxa0usnicxa0acidxa0inxa0theirxa0cultures).农业与生物化学(Agriculturalxa0andxa0Biologicalxa0Chemistry).49(11):3347-3348.)从地衣叶状体中分离地衣形成真菌(lichenxa0formingxa0fungi,LFF),在15°C下在MY培养基中培养60天。然后对其进行干燥并分别收集50g地衣叶状体及LFF。用1L丙酮或者甲醇对其提取3小时,该操作重复3次。然后将丙酮或甲醇提取物在40°C下进行真空蒸发,用10%DMSO溶解,然后稀释至1mg/ml。实施例2:地衣叶状体提取物及地衣形成真菌提取物的AChE抑制活性为了研究从实施例1得到的地衣叶状体提取物及地衣形成真菌(LFF)提取物的AChE抑制活性,采用埃尔曼等(Ellman,G.E.,Courtnery,D.,Andres,V.,Featherstone,R.M.,乙酰胆碱酯酶活性的新的快速比色测定法(Axa0newxa0andxa0rapidxa0colorimetricxa0determinationxa0ofxa0acetylcholinesterasexa0activity.),Biochem.Pharmacol.1961,7,88-95)中描述的比色法,以碘化乙酰硫代胆碱(acetylthiocholinexa0iodide)作为底物。首先,将PC12细胞培养物用5体积(5vol)均质缓冲液(10mMTris-HCl(pHxa07.2),含有1Mxa0NaCl、50mMxa0MgCl₂及1%Tritonxa0X-100)在Glass-ntent="drawing" img-format="tif" inline="yes" orientation="portrait" wi="118"/>均质器(Terre-Haute,Ind.,USA)中进行均质化,然后以10,000g进行离心30分钟。所得的上清液用作酶源。所有提取步骤均在4°C条件下实施。将牛血清白蛋白作为蛋白标准,采用二喹啉甲酸(bicinchoninicxa0acid)试剂盒(Sigmaxa0Co.,St.Louis,Mo.,USA)测定蛋白浓度。使用96孔微量滴定板(microtiterxa0plate)格式利用分光光度法监测AChE的水解率。将冷冻干燥的提取物先溶解于5%二甲基亚砜,将溶液稀释至1,000μg/ml。将各提取物与酶溶液混合,37°C下孵育15分钟。向上述反应混合物中加入埃尔曼(Ellman)反应混合物(0.5mM乙酰硫代胆碱、1mMxa05,5′二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB))的50mM磷酸钠缓冲液(pHxa08.0)后,立刻读取405nm处的吸光度。为了确认反应是否为线性,以2分钟为间隔重复读数10分钟。计算地衣叶状体提取物及LFF提取物的AChE抑制活性百分率,作为最大活性的抑制百分率(阴性对照孔),并测定IC₅₀。重复上述实验3次,用平均值确定IC₅₀。地衣叶状体提取物的AChE抑制活性如图1所示,LFF提取物的AChE抑制活性如图2所示。从图1及图2可知,地衣叶状体提取物的AChE抑制活性为约15~35%;除紫色细杆石蕊(Cladoniaxa0macilentaxa0purple)之外,地衣形成真菌提取物的AChE抑制活性低于30%。当用1mg/ml紫色细杆石蕊处理时,紫色细杆石蕊的AChE抑制活性为约60%。在LFF低纯度中具有高抑制活性表面其可用作功能性材料。实施例3:来源于紫色细杆石蕊提取物的布里醌的分离及鉴别用乙酸乙酯对实施例1的紫色细杆石蕊的1L甲醇提取物或其发酵液进行提取,并真空浓缩3小时。然后在室温下对浓缩的提取物进行开放柱层析(openxa0columnxa0chromatography),得到10个分离物。通过MS及NMR对其分离物中的紫色结晶进行分析,鉴定其为布里醌(化学式I的化合物)。通过上述实施例2的方法对布里醌的AChE抑制活性进行测定。结果,抑制呈剂量-依赖性(图3)。布里醌的浓度从0增加至100μg/ml,伴随抑制百分率快速增加。50%酶抑制IC₅₀所需的浓度为27.1μg/ml(83.1μM)。该结果表明来源于紫色细杆石蕊提取物的布里醌具有AChE抑制活性,并能增加乙酰胆碱的量。实施例4:布里醌对受损PC12细胞的毒性试验4.1细胞的购买和培养PC12细胞购自韩国细胞系库(Koreanxa0Cellxa0Linexa0Bank,KCLB)。将这些细胞在含有左旋谷氨酰胺(l-glutamine)、5%胎牛血清(FBS)、10%马血清和抗生素的生长培养基RPMI-1640中培养。将细胞置于37°C、5%CO₂培养箱中。4.2细胞毒性试验实验前24小时将有活力的PC12细胞(10⁴/孔)接种到96-孔胶原涂层板中。实验当天,用梯度浓度(6.25、12.5、25、50和100μg/ml)的布里醌培养细胞3小时。采用常规的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)还原法(Shi,D.H.,Wu,J.H.,Ge,H.M.和Tan,R.X.2009.一种新的乙酰胆碱酯酶抑制剂hopeahainolxa0A对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用(Protectivexa0effectxa0ofxa0hopeahainolxa0A,axa0novelxa0acetylcholinesterasexa0inhibitor,onxa0hydrogenxa0peroxide-inducedxa0injuryxa0inxa0PC12xa0cells).环境毒理学和药理学(Environmentalxa0Toxicologyxa0andxa0Pharmacology),28(1):30-36.)测定细胞活力。将0.5mg/mlxa0MTT溶液添加到培养基中孵育4小时。在DMSO中裂解细胞,通过用酶标仪(microplatexa0reader)(VERSAmax,分子仪器,加利福尼亚,美国)在570nm处测定吸光度,对MTT甲臜的量进行定量。布里醌对PC12细胞的体外毒性总结于图4中。实验结果表明,与布里醌(6.25、12.5、25和50μg/ml)和0.5%DMSO共同培养的PC12细胞的细胞活力与未经任何处理的细胞没有显著差异,这表明布里醌对PC12细胞的体外毒性低。但与100μg/ml的布里醌共同培养的PC12细胞的细胞活力与未经任何处理的细胞有显著差异,这表明布里醌对PC12细胞有体外毒性。实施例5:布里醌对细胞的氧化应激试验实验前24小时将有活力的细胞(10⁴/孔)接种到96-孔胶原涂层板中,以检测布里醌的氧化应激。实验当天,用100μMxa0DCFH-DA培养细胞30分钟。除去DCFH-DA后,洗涤细胞并用RPMI培养基孵育。然后用不同浓度(25、12.5、6.25和1μg/ml)的布里醌预处理PC12细胞30分钟。然后用或不用200μMxa0H₂O₂处理细胞30分钟,用荧光酶标仪(SpectraMax,分子仪器,加利福尼亚州,美国)最终定量荧光性。布里醌对体外氧化应激的预防总结于图5中。结果表明,用12.5μg/ml和25μg/ml布里醌预处理的细胞明显降低了H₂O₂诱导的氧化应激。实施例6:布里醌对AChE的抑制动力学试验使用来自电鳗(electricxa0eel)的乙酰胆碱酯酶进行动力学研究。使用四个底物浓度(250、500、1000和2000μM)和两个布里醌浓度(61和122μM)进行酶活性测定。通过双倒数(Lineweaver-Burk)作图检测布里醌对酶的抑制类型。图的斜率或截距对应抑制剂浓度给出了估计的K_I(抑制剂与酶结合的解离常数)和K_IS(抑制剂与酶-底物复合物结合的解离常数)。结果总结于图6中。结果表明,伴随较高浓度的布里醌,布里醌的抑制行为增加了斜率和y轴截距,这表明布里醌是一种混合-II抑制剂。K_I(204μM)大于K_IS(12.5μM),表明抑制剂对酶-底物复合物的亲和力比游离酶的强。实施例7:布里醌对电鳗(Elecyrophorusxa0electricus)AChE的分子对接采用Accelrysxa0Discoveryxa0Studioxa0V2.5软件进行分子对接。从蛋白数据库下载电鳗(Elecyrophorusxa0electricus)AChE的高分辨率X射线晶体结构(PDB代码:1C2B)。通过Chemxa0Officexa0Ultraxa02008xa0V1剑桥软件绘制布里醌分子的3-D结构。然后将这两个分子分别定义为受体和配体。从蛋白的活性部位选择受体的结合范围(bindingxa0sphere)。然后添加氢原子并利用CHARMm力场。采用LigandFit(LibDock)模块将配体与结合范围对接。所有其它参数均设置为默认。计算并优化结合的相互作用能量,包括整个能量和静电能量。对接构象,然后用对接的构型分析结合的相互作用。结果表明,布里醌与AChE的主要结合位点都通过C-12O原子与位于AChE活性位点上的Ser203氨基酸残基的OH基团之间的直接氢键得以实现。C-8OH基团和O原子与Tyr124氨基酸残基上的OH基团之间也可形成氢键(数据未示出)。实施例8:含有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的片剂的制备成分含量紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物200mg,或者布里醌1mg玉米淀粉68mg乳糖90mg微晶纤维素40mg硬脂酸镁2mg根据常规精制剂(refinement)的生产方法,按照指定含量添加上述成分并均匀混合。然后,搅拌并颗粒化。干燥后使用压片机生产每1精制剂中含有活性成分紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的预期的精制剂。实施例9:含有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的胶囊剂的制备成分含量紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物200mg,或者布里醌1mg玉米淀粉68mg乳糖90mg微晶纤维素40mg硬脂酸镁2mg根据常规胶囊剂的生产方法,按照指定含量添加上述成分并均匀混合。然后,填充至适当规格的明胶胶囊中,使每1粒胶囊中含有200mg紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者1mg布里醌,生产预期的胶囊剂。实施例10:含有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的咀嚼片的制备成分含量紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物200mg,或者布里醌1mg砂糖糖浆240mg香料(薄荷香或者柠檬香)2mg玉米淀粉60mg甘露醇100mg硬脂酸镁20mg适量的纯化水根据常规咀嚼片的生产方法,将上述成分与适量的纯化水混合。然后,加热溶解,冷却,放入模具中,生产预期形状的咀嚼片,使每1片中含有200mg紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者1mg布里醌。实施例11:含有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的糖果的制备成分含量紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物200mg,或者布里醌1mg砂糖糖浆640mg香料(薄荷香或者柠檬香)2mg淀粉糖浆230mg50%酒石酸20mg适量的纯化水将砂糖糖浆完全融解于少量水并加热至110°C后,向剩余的融体中添加融解有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的剩余水和砂糖糖浆。将温度升高至145°C。熄火。添加香料和酒石酸进行混合。将温度冷却至75~80°C后,采用星轮式镇压器(starxa0roller)进行压制成型,生产含有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的糖果。实施例12:含有紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者布里醌的饮料的制备成分含量紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物200mg,或者布里醌1mg浓缩果汁2g蔗糖12g柠檬酸钠100mg香料70mg适量的纯化水根据常规饮料的生产方法,按照指定含量将上述成分与适量的纯化水混合。加热并溶解后,冷却饮料,并填充至容器中。由此生产每1瓶200ml容量的饮料中含有200mg紫色细杆石蕊的菌体或培养提取物或者1mg布里醌的饮料。在用上述具体实施方案描述本发明时,本领域技术人员应当认识到对本发明进行的各种修改和改变均落入如所附权利要求所限定的本发明的范围内。